بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

پایان نامه سرطان پستان
طراحی روش RT – PCR
تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2
شناسایی تومورهای erbB2
شناسایی تومورهای erbB2 با ایمونوهیستوشیمی (IHC)

رفتن به سایت اصلی

رساله دکترای رشته پزشکی

 

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

 

 

 

چکیده:

سرطان پستان از شایع ترین سرطان های زنان است که سبب مرگ زنان زیادی می شود. موتاسیون های بسیاری نظیر ازدیاد آنکوژن ها و یا حذف ژن های سرکوبگر تومور در این سرطان شناسایی شده اند؛ در بین آنکوژن ها، erb-B2 که به خانواده EGFR (گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی) تعلق دارد در 30%-25% تومورهای پستان با منشاء سلول های داکتال ازدیاد پیدا می کند. (80% سرطان های پستان منشا داکتال دارند.)در بیمارانی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده بیماری می تواند تا حدی با استفاده از یک آنتی بادی مونوکلنال انسانی شده علیه محصول پروتئینی ژن erb-B2 به نام هرسپتین مهار شود.از این رو شناسایی تومورها یی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده اهمیت دارد.روش روتین در شناسایی این تومورها ایمونوهیستوشیمی (IHC) می باشد.

 

در این مطالعه 50 نمونه از بیمارستان دی جمع آوری شد که بر اساس نتایج IHC، 32% نمونه ها ازدیاد آنکوژن erb-B2 را نشان می دادند.جهت مقایسه RT-PCR و IHC، RNA این نمونه ها استخراج شد و RT-PCR برای آن ها انجام شد که در آن دو جفت پرایمر طراحی شده به طور همزمان ژن erb-B2 را به همراه ژن بتاگلوبین به عنوان کنترل داخلی تکثیر می کردند؛ سپس محصولات RT-PCR بر روی ژل آگاروز برده شدند و شدت باند های مربوط به erb-B2 و کنترل داخلی با یکدیگر مقایسه گردید. در نهایت از مقایسه نتایج حاصله از RT-PCR با نتایج IHC مشخص شد که بازده RT-PCR در تشخیص نمونه های با درجه IHC 3+، 100% و در مورد نمونه های 2+، نیز 100% می باشد.   همچنین آزمایش PCR بر روی DNA استخراج شده از بافت توموری و DNA نرمال استخراج شده از بافت فرد سالم انجام گرفت که نتایج مربوط به این آزمایش نیز نتایج بدست آمده از RT-PCR را تایید می کردند. 

 

 

کلمات کلیدی:

سرطان

داکتال

آنکوژن ها

موتاسیون

سرطان پستان

سرطان های زنان

مقایسه RT-PCR و IHC، RNA

 

 

مقدمه:

 در پستان نرمال، داکتها و لوبولها بوسیله دو نوع سلول فرش می شوند یک دسته سلول های مسطح که یک لایه ناپیوسته از سلول های قابل انقباض حاوی میوفیلامان ها هستند (سلول های میواپی تلیال  ) و روی غشای پایه قرار دارند . این سلول ها در خروج شیر در طی دوره شیر سازی همکاری می کنند و نقش مهمی در حفظ ساختار و عملکرد نرمال لوبول ها و غشای پایه دارند (86). لایه دومی از سلول‌های پوششی کف لومن را فرش کرده است ( سلول های لومینال   ). 

 

داکت های انتهایی و لوبولها شیرتولید می کنند ولی سلول های بخشهای دیگر داکت، در تولید شیر نقشی ندارند.منشأ سلول های لومینال و اپیتلیال ، سلول های بنیادی واقع در ترمینال داکت ها در نظر گرفته  می شود(6). بخش اصلی بستر پستان از بافت پیوندی فیبروس متراکم مخلوط با بافت چربی تشکیل شده است که همان  بستره بین لوبولی  است. لوبولها بوسیله یک بستره ظریف احاطه شده اند که بافت ویژه پستان است و خصوصیات پاسخ دهنده به هورمون دارد و دارای تعدادی  لنفوسیت می باشد  (85).  

 

 

 

فهرست مطالب

چکیده: 1

فصل اول:مقدمه 5

1-1- غدد پستانی 6

1-1-1- ساختار پستان نرمال 6

شکل (1-1 )- ساختار پستان نرمال (55) 7

1-1-2- تغییرات پستان در چرخه زندگی 8

1-2 -کارسینومای پستان 10

1-2-1-کارسینوما 10

1-2-2- ریسک فاکتورها 12

1-2-3- سبب شناسی سرطان پستان 16

1-2-5- سرطان پستان غیر وراثتی 19

1-2-5-1-2- تومور ساپرسورها 21

1-2-5-1-4- مسیرهای بقای سلولی و مرگ سلولی 23

1-2-5-1-4-1- تلومراز 23

1-2-5-1-4-2- ژن های وابسته به آپوپتوز 24

1-2-6-1- طبقه بندی کارسینوماهای پستان بر اساس مطالعات میکرواری (از لحاظ ملکولی) 26

1-2-6-1-1-کارسینوماهای ER- مثبت 26

1-2-6-1-2-کارسینومای های ER- منفی 26

1-2-6-1-3-کارسینوماهای  Basal-like 27

1-2-6-1-4-کارسینوماهای HER2/neu- مثبت 27

شکل 1-3- نمای شماتیک خانواده HER (90) 28

1-2-7- طبقه بندی کارسینوماهای پستان از لحاظ بافت شناسی 31

1-2-7-1- کارسینوما های در جا و تهاجمی(شکل 1-6 ) 31

شکل (1-5) – کارسینوماهای درجا و تهاجمی (85) 32

 

فصل دوم:مروری بر مطالعات انجام شده 34

2-1- تکنیک های سنجش HER2/neu 35

2-1-1- ایمونوهیستوشیمی (IHC) 35

2-1-2- ساترن و اسلات بلات 37

2-1-3-تکنیک FISH 37

2-1-4- تکنیک CISH ) (Chromogenic in situ hybridization 38

2-1-5- تکنیک ( Enzime – linked immunosorbent assay ) ELISA 38

2-2- وضعیت HER2 و پیشگویی پاسخ به درمان با هرسپتین 40

2-3- HER2/neu فسفریله به عنوان یک مارکرپروگنوستیک و پیش گویی بالقوه 41

2-4- سنجش بخش خارج سلولی HER2 در جریان خون به عنوان تومور مارکر 41

2-5- خلاصه 42

2-2- هدف 43

 

فصل سوم:مواد و روشها 44

مواد و روشها 44

3-1- استخراج RNA ی كل از بافت 45

3-2- بررسی كمی و كیفی RNA ی استخراج شده 50

3-2-1- UV اسپكتروفتومتری 50

3-2-2- الكتروفورز ژل آگارز (106) 52

طرز تهیه محلول ها و بافرهای مورد نیاز در الكتروفورز : 53

محلول اتیدیوم بروماید (10 mg /ml) 54

مواد و وسایل لازم 55

جدول 3-1 – رابطه درصد ژل آگارژ با اندازه مولكول DNA 58

3-3 تیمار RNAی استخراج شده با آنزیم DNase [149] 58

طرز تهیه مخلوط dNTP از هر یك از نوكلئوتیدها 60

3-5- واكنش PCR [2] 63

3-5-1 طراحی پرایمر: 63

3-5-2- آماده سازی پرایمرهای PCR [2] 66

3-7- استخراج DNA از بافت پستانداران با استفاده از Accuprep Genomic DNA Extraction kit (Bioneer) 70

3-7-1- سنجش غلظت DNA 71

3-9- ایمنوهیستوشیمی Immunohistochemical (IHC) Techniques 73

 

فصل چهارم:بحث و نتایج 76

بحث و نتایج 76

4-1- نتایج 77

4-1-1- تعیین کیفیت و کمیت RNA ی استخراجی 77

4-1-2- بهینه سازی واکنش PCR 78

4-1-3-  RT – PCR 80

4-2-  بحث و پیشنهادات 84

4-2-1- بحث 84

4-2-2- علت انتخاب RT- PCR 85

4-2-4- پیشنهادات 87

منابع 88

 

 

 

  • مبانی نظری بررسی رابطه معاملات با اشخاص وابسته با عملکرد شرکتهای پذیرفته شده در بورس

    مبانی نظری بررسی رابطه معاملات با اشخاص وابسته با عملکرد شرکتهای پذیرفته شده در بورس معاملات با اشخاص وابسته مبانی نظری معاملات با اشخاص وابسته تعریف معاملات با اشخاص وابسته تاثیر معاملات با اشخاص وابسته انواع معاملات با اشخاص وابسته…

  • پاورپوينت زیارت عتبات عالیات: نجف

    پاورپوينت زیارت عتبات عالیات: نجف پاورپوینت در مورد زیارت عتبات عالیات پاورپوینت اماکن زیارتی پاورپوینت اماکن زیارتی نجف دانلود پاورپوینت زیارت عتبات عالیات رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوينت زیارت عتبات عالیات: نجف جهت رشته دین و مذهب قالب 38…

  • پاورپوینت مدیریت تعارض و مذاکره

    پاورپوینت مدیریت تعارض و مذاکره رفتن به سايت اصلي عنوان: پاورپوینت مدیریت تعارض و مذاکره دسته: مدیریت ( رفتار سازمانی) فرمت: پاورپوینت تعداد اسلاید: 38 در این فایل بصورت جامع به بررسی موضوع مدیریت تعارض و مذاکره پرداخته ایم. این…

  • پرسشنامه اعتماد به نفس جنسی آن هوپر با نمره گذاری، روایی و پایایی

    پرسشنامه اعتماد به نفس جنسی آن هوپر با نمره گذاری، روایی و پایایی کلمات کلیدی : مقیاس اعتماد به نفس جنسی پرسشنامه اعتماد به نفس جنسی پرسشنامه اعتماد به نفس جنسی آن هوپر پرسشنامه اعتماد به نفس جنسی 15 سوالی…

  • پایان نامه رشته مکانیک و صنایع با عنوان سیستم های رطوبت زدا

    پایان نامه رشته مکانیک و صنایع با عنوان سیستم های رطوبت زدا رطوبت زدایی مواد جاذب رطوبت سیستم های رطوبت زدا دانلود پایان نامه رشته مکانیک و صنایع با عنوان سیستم های رطوبت زدا سیستم همکاری در فروش فایل همکاری…

  • مبانی نظری طراحی پلان آزاد در محیط های اداری و تاثیر آن بر رضایت شغلی کارکنان

    مبانی نظری طراحی پلان آزاد در محیط های اداری و تاثیر آن بر رضایت شغلی کارکنان طراحی پلان آزاد رضایتمندی محیطی طراحی پلان آزاد در محیط های اداری استفاده از پلان آزاد در طراحی محیط های اداری تاثیر طراحی پلان…

  • پاورپوینت تشریح نوشهرگرایی

    پاورپوینت تشریح نوشهرگرایی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت تشریح نوشهرگرایی جهت رشته عمران و شهرسازی در قالب 45 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش       در سالهاي اخير جنبش…

  • دانلود تحقیق خلاقیت فردی و نوآوری با فرمت ورد

    دانلود تحقیق خلاقیت فردی و نوآوری با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی خلاقیت فردی و نوآوری با فرمت docx در قالب 15 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش می باشد…

  • پاورپوینت تغییر در سازمان برای تکامل

    پاورپوینت تغییر در سازمان برای تکامل پاورپوینت تغییر در سازمان برای تکامل تغییر در سازمان برای تکامل حقایق تغییر فرآیند تغییر مراحل تغییر نیروهایی که باعث تغییر می شود مقاومت در برابر تغییر مقاومتهایی که منشا سازمانی دارند رفتن به…

  • مقاله مطالعه آزمایشگاهی آبشستگی موضعی اطراف سری آبشکن های L

    مقاله مطالعه آزمایشگاهی آبشستگی موضعی اطراف سری آبشکن های L عمق آبشستگی آبشستگی موضعی آبشکن های L شکل فاصله بین آبشکن ها حفاظت دیواره خارجی رودخانه ها مقاله آبشستگی موضعی اطراف سری آبشکن های L شکل مقاله آبشستگی در آبشکن…

  • پاورپوینت بررسی تربیت بدنی در مدارس

    پاورپوینت بررسی تربیت بدنی در مدارس رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت بررسی تربیت بدنی در مدارس جهت رشته تربیت بدنی و علوم ورزشی در قالب 203 اسلاید و با فرمت ppt به صورت کامل و جامع و با قابلیت…

  • پاورپوینت فضايل اخلاقی مربوط به امور جنسی

    پاورپوینت فضايل اخلاقی مربوط به امور جنسی پاورپوینت اخلاق جنسی پاورپوینت رابطه جنسی پاورپوینت عوامل شهوت پرستي پاورپوینت فضايل اخلاقي مربوط به امور جنسي رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت فضايل اخلاقی مربوط به امور جنسی جهت رشته بهداشت عمومی…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق نگرش شغلی

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق نگرش شغلی مبانی نظری نگرش شغلی مبانی نظری در مورد نگرش شغلی مبانی نظری نگرش شغلی کارکنان مبانی نظری در مورد نگرش شغلی کارکنان پیشینه نگرش شغلی پیشینه تحقیق نگرش شغلی پیشینه پژوهش نگرش شغلی…

  • پاورپوینت روش بدیعه پردازی

    پاورپوینت روش بدیعه پردازی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت روش بدیعه پردازی جهت رشته ی روان شناسی در قالب 18 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش       روشی است…

  • پرسشنامه تاثیر فرهنگ سازمانی بر عملکردهای شغلی کارکنان بانک ملی شهر اراک از طریق فرآیند دانش

    پرسشنامه تاثیر فرهنگ سازمانی بر عملکردهای شغلی کارکنان بانک ملی شهر اراک از طریق فرآیند دانش پرسشنامه فرهنگ سازمانی پرسشنامه عملکردهای شغلی کارکنان پرسشنامه فرآیند دانش پرسشنامه تاثیر فرهنگ سازمانی بر عملکردهای شغلی کارکنان پرسشنامه فرهنگ سازمانی با فرآیند دانش…

  • پیشینه نظری و فصل دوم پایان نامه استرس تحصیلی

    پیشینه نظری و فصل دوم پایان نامه استرس تحصیلی فصل دوم پایان نامه استرس تحصیلی مبانی نظری استرس تحصیلی پیشینه تحقیق استرس تحصیلی پیشینه داخلی استرس تحصیلی پیشینه خارجی استرس تحصیلی پیشینه پژوهش استرس تحصیلی پیشینه نظری استرس تحصیلی ادبیات…

  • دانلود پاورپوینت هوش تجاری BI

    دانلود پاورپوینت هوش تجاری BI دانلود پاورپوینت هوش تجاری پاورپوینت در مورد هوش تجاری دانلود پاورپوینت درباره هوش تجاری پاورپوینت برای هوش تجاری پاورپوینت درباره هوش تجاری رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت هوش تجاری BI جهت رشته مدیریت بازرگانی…

  • پاورپوینت عوامل اصلی در انتقال ویروس ایدز

    پاورپوینت عوامل اصلی در انتقال ویروس ایدز پاورپوینت انتقال ویروس ایدز از طریق لیزر پاورپوینت انتقال ویروس ایدز از طریق ماشین اصلاح پاورپوینت انتقال ویروس ایدز از طریق زخم پاورپوینت انتقال ویروس ایدز از طریق چشم پاورپوینت انتقال ویروس ایدز…

  • کاربرد تکنولوژی نانو در مدیریت مخازن نفت و گاز

    کاربرد تکنولوژی نانو در مدیریت مخازن نفت و گاز نانو در صنعت نفت کاربرد نانو در صنایع نفت و گاز مدیریت مخازن نفت و گاز کنترل تولید ماسه و ذرات ریز پایش چاهها با استفاده از نانوحسگرها کنترل تولید ماسه…

  • تجزیه و تحلیل و پیاده سازی نرم افزار حقوق و دستمزد

    تجزیه و تحلیل و پیاده سازی نرم افزار حقوق و دستمزد شی گرایی آموزش برنامه نویسی پیاده سازی نرم افزار حقوق و دستمزد تجزیه و تحلیل سیستم حقوق و دستمزد تجزیه و تحلیل و پیاده سازی نرم افزار حقوق و…

  • پیشینه نظری و فصل دوم پایان نامه سازگاری شغلی

    پیشینه نظری و فصل دوم پایان نامه سازگاری شغلی کلمات کلیدی : فصل دوم پایان نامه سازگاری شغلی مبانی نظری سازگاری شغلی پیشینه تحقیق سازگاری شغلی پیشینه داخلی سازگاری شغلی پیشینه خارجی سازگاری شغلی پیشینه پژوهش سازگاری شغلی پیشینه نظری…

  • پاورپوینت آشنایی با آرایش الکترونی و تناوب شیمیایی

    پاورپوینت آشنایی با آرایش الکترونی و تناوب شیمیایی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت آشنایی با آرایش الکترونی و تناوب شیمیایی جهت رشته شیمی در قالب 22 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق اختلال اضطراب اجتماعی

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق اختلال اضطراب اجتماعی مبانی نظری اختلال اضطراب اجتماعی ادبیات نظری اختلال اضطراب اجتماعی چارچوب نظری اختلال اضطراب اجتماعی فصل دوم پایان نامه اختلال اضطراب اجتماعی پیشینه اختلال اضطراب اجتماعی پیشینه تحقیق اختلال اضطراب اجتماعی پیشینه…

  • پاورپوینت کتاب اصول حسابداری 2 از یحیی یگانه

    پاورپوینت کتاب اصول حسابداری 2 از یحیی یگانه رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت کتاب اصول حسابداری 2 از یحیی یگانه جهت رشته ی حسابداری در قالب 404 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با…

  • ارائه مفهومی جدید در تعهد سازمانی و ویژگی های شغلی

    ارائه مفهومی جدید در تعهد سازمانی و ویژگی های شغلی پایان نامه رابطه عوامل شغلی با تعهد سازمانی رابطه ویژگیهای شغلی و تعهد سازمانی کارکنان مدل ویژگی های شغلی مدل ویژگیهای شغلی اولدهام و هاکمن دیدگاه آلن و مایر از…

  • پرسشنامه تاثیر شبکه های کامپیوتری برای دسترسی اطلاعات در سازمان ها

    پرسشنامه تاثیر شبکه های کامپیوتری برای دسترسی اطلاعات در سازمان ها پرسشنامه دسترسی اطلاعات پرسشنامه دسترسی اطلاعات در سازمان پرسشنامه شبکه های کامپیوتری پرسشنامه دسترسی اطلاعات با شبکه های کامپیوتری رفتن به سایت اصلی دانلود پرسشنامه پایان نامه رشته مدیریت پرسشنامه تاثیر شبکه های…

  • پاورپوینت خلاصه کتاب تحقیق در عملیات (1) تألیف دکتر عادل آذر

    پاورپوینت خلاصه کتاب تحقیق در عملیات (1) تألیف دکتر عادل آذر کلمات کلیدی : پاورپوینت خلاصه کتاب تحقیق در عملیات (1) تألیف دکتر عادل آذر خلاصه کتاب تحقیق در عملیات (1) دکتر عادل آذر پاورپوینت کتاب تحقیق در عملیات 1…

  • بررسی راهکارهای مقاوم سازی سازه های فولادی با سیستم بادبندی واگرا

    بررسی راهکارهای مقاوم سازی سازه های فولادی با سیستم بادبندی واگرا سازه های فولادی سازه های فولادی با سیستم بادبندی واگرا پایان نامه مقاوم سازی سازه های فولادی بررسی سیستم مهاربندی واگرا روشهای پوش آور و طیف ظرفیت مقاوم سازی…

  • ارزیابی ارتباط عزت نفس با پیشرفت تحصیلی دختران دبیرستانی

    ارزیابی ارتباط عزت نفس با پیشرفت تحصیلی دختران دبیرستانی عزت نفس پیشرفت تحصیلی بررسی عزت نفس دختران دبیرستانی بررسی پیشرفت تحصیلی دختران دبیرستانی پایان نامه رابطه عزت نفس با پیشرفت تحصیلی ارتباط عزت نفس با پیشرفت تحصیلی دختران دبیرستانی پایان…

  • دانلود تحقیق تدریس و عوامل موثر بر آن با فرمت ورد

    دانلود تحقیق تدریس و عوامل موثر بر آن با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی تدریس و عوامل موثر بر آن با فرمت docx در قالب 14 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با…

  • دانلود گزارش کارآموزی رشته کامپیوتر با عنوان طراحی وبسایت

    دانلود گزارش کارآموزی رشته کامپیوتر با عنوان طراحی وبسایت صفحات وب طراحی وبسایت راه اندازی سایت پیاده سازی یک وبسایت دانلود گزارش کارآموزی رشته کامپیوتر دانلود گزارش کارآموزی کامپیوتر دانلود کارآموزی کامپیوتر دانلود گزارش کارآموزی رفتن به سایت اصلی دانلود…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق استقرار مدیریت دانش در سازمانهای دولتی

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق استقرار مدیریت دانش در سازمانهای دولتی مبانی نظری استقرار مدیریت دانش دانلود مبانی نظری استقرار مدیریت دانش پیشینه تحقیق استقرار مدیریت دانش ادبیات نظری استقرار مدیریت دانش فصل دوم پایان نامه استقرار مدیریت دانش مبانی…

  • پاورپوینت تحول نظريه هاي مديريت و پارادايم در حال تكوين

    پاورپوینت تحول نظريه هاي مديريت و پارادايم در حال تكوين رفتن به سايت اصلي عنوان: پاورپوینت تحول نظريه هاي مديريت و ”پارادايم“ در حال تكوين دسته: مدیریت فرمت: پاورپوینت تعداد اسلاید:27 اسلاید این فایل در زمینه تحول نظريه هاي مديريت…

  • پایان نامه رشته محیط زیست با عنوان روشهای مدیریت،بیخطر سازی و دفن مواد زاید خطرناک

    پایان نامه رشته محیط زیست با عنوان روشهای مدیریت،بیخطر سازی و دفن مواد زاید خطرناک مدیریت پسماندها روشهای مدیریت مواد زاید خطرناک روشهای دفن مواد زاید خطرناک روشهای بیخطر سازی مواد زاید خطرناک پایان نامه مدیریت پسماند پایان نامه مواد…

  • بررسی تقنین در فقه امامیه و تاکید بر نظام قضایی افغانستان

    بررسی تقنین در فقه امامیه و تاکید بر نظام قضایی افغانستان تقنین در فقه امامیه اصول ماهوی تقنین تدوین فقه شریعت اسلام تقنین در نظام حقوقی افغانستان اشکالات قانونی کردن شریعت تقنین از نگاه شیعه دانلود تحقیق تقنین دانلود تحقیق…