بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

پایان نامه سرطان پستان
طراحی روش RT – PCR
تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2
شناسایی تومورهای erbB2
شناسایی تومورهای erbB2 با ایمونوهیستوشیمی (IHC)

رفتن به سایت اصلی

رساله دکترای رشته پزشکی

 

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

 

 

 

چکیده:

سرطان پستان از شایع ترین سرطان های زنان است که سبب مرگ زنان زیادی می شود. موتاسیون های بسیاری نظیر ازدیاد آنکوژن ها و یا حذف ژن های سرکوبگر تومور در این سرطان شناسایی شده اند؛ در بین آنکوژن ها، erb-B2 که به خانواده EGFR (گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی) تعلق دارد در 30%-25% تومورهای پستان با منشاء سلول های داکتال ازدیاد پیدا می کند. (80% سرطان های پستان منشا داکتال دارند.)در بیمارانی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده بیماری می تواند تا حدی با استفاده از یک آنتی بادی مونوکلنال انسانی شده علیه محصول پروتئینی ژن erb-B2 به نام هرسپتین مهار شود.از این رو شناسایی تومورها یی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده اهمیت دارد.روش روتین در شناسایی این تومورها ایمونوهیستوشیمی (IHC) می باشد.

 

در این مطالعه 50 نمونه از بیمارستان دی جمع آوری شد که بر اساس نتایج IHC، 32% نمونه ها ازدیاد آنکوژن erb-B2 را نشان می دادند.جهت مقایسه RT-PCR و IHC، RNA این نمونه ها استخراج شد و RT-PCR برای آن ها انجام شد که در آن دو جفت پرایمر طراحی شده به طور همزمان ژن erb-B2 را به همراه ژن بتاگلوبین به عنوان کنترل داخلی تکثیر می کردند؛ سپس محصولات RT-PCR بر روی ژل آگاروز برده شدند و شدت باند های مربوط به erb-B2 و کنترل داخلی با یکدیگر مقایسه گردید. در نهایت از مقایسه نتایج حاصله از RT-PCR با نتایج IHC مشخص شد که بازده RT-PCR در تشخیص نمونه های با درجه IHC 3+، 100% و در مورد نمونه های 2+، نیز 100% می باشد.   همچنین آزمایش PCR بر روی DNA استخراج شده از بافت توموری و DNA نرمال استخراج شده از بافت فرد سالم انجام گرفت که نتایج مربوط به این آزمایش نیز نتایج بدست آمده از RT-PCR را تایید می کردند. 

 

 

کلمات کلیدی:

سرطان

داکتال

آنکوژن ها

موتاسیون

سرطان پستان

سرطان های زنان

مقایسه RT-PCR و IHC، RNA

 

 

مقدمه:

 در پستان نرمال، داکتها و لوبولها بوسیله دو نوع سلول فرش می شوند یک دسته سلول های مسطح که یک لایه ناپیوسته از سلول های قابل انقباض حاوی میوفیلامان ها هستند (سلول های میواپی تلیال  ) و روی غشای پایه قرار دارند . این سلول ها در خروج شیر در طی دوره شیر سازی همکاری می کنند و نقش مهمی در حفظ ساختار و عملکرد نرمال لوبول ها و غشای پایه دارند (86). لایه دومی از سلول‌های پوششی کف لومن را فرش کرده است ( سلول های لومینال   ). 

 

داکت های انتهایی و لوبولها شیرتولید می کنند ولی سلول های بخشهای دیگر داکت، در تولید شیر نقشی ندارند.منشأ سلول های لومینال و اپیتلیال ، سلول های بنیادی واقع در ترمینال داکت ها در نظر گرفته  می شود(6). بخش اصلی بستر پستان از بافت پیوندی فیبروس متراکم مخلوط با بافت چربی تشکیل شده است که همان  بستره بین لوبولی  است. لوبولها بوسیله یک بستره ظریف احاطه شده اند که بافت ویژه پستان است و خصوصیات پاسخ دهنده به هورمون دارد و دارای تعدادی  لنفوسیت می باشد  (85).  

 

 

 

فهرست مطالب

چکیده: 1

فصل اول:مقدمه 5

1-1- غدد پستانی 6

1-1-1- ساختار پستان نرمال 6

شکل (1-1 )- ساختار پستان نرمال (55) 7

1-1-2- تغییرات پستان در چرخه زندگی 8

1-2 -کارسینومای پستان 10

1-2-1-کارسینوما 10

1-2-2- ریسک فاکتورها 12

1-2-3- سبب شناسی سرطان پستان 16

1-2-5- سرطان پستان غیر وراثتی 19

1-2-5-1-2- تومور ساپرسورها 21

1-2-5-1-4- مسیرهای بقای سلولی و مرگ سلولی 23

1-2-5-1-4-1- تلومراز 23

1-2-5-1-4-2- ژن های وابسته به آپوپتوز 24

1-2-6-1- طبقه بندی کارسینوماهای پستان بر اساس مطالعات میکرواری (از لحاظ ملکولی) 26

1-2-6-1-1-کارسینوماهای ER- مثبت 26

1-2-6-1-2-کارسینومای های ER- منفی 26

1-2-6-1-3-کارسینوماهای  Basal-like 27

1-2-6-1-4-کارسینوماهای HER2/neu- مثبت 27

شکل 1-3- نمای شماتیک خانواده HER (90) 28

1-2-7- طبقه بندی کارسینوماهای پستان از لحاظ بافت شناسی 31

1-2-7-1- کارسینوما های در جا و تهاجمی(شکل 1-6 ) 31

شکل (1-5) – کارسینوماهای درجا و تهاجمی (85) 32

 

فصل دوم:مروری بر مطالعات انجام شده 34

2-1- تکنیک های سنجش HER2/neu 35

2-1-1- ایمونوهیستوشیمی (IHC) 35

2-1-2- ساترن و اسلات بلات 37

2-1-3-تکنیک FISH 37

2-1-4- تکنیک CISH ) (Chromogenic in situ hybridization 38

2-1-5- تکنیک ( Enzime – linked immunosorbent assay ) ELISA 38

2-2- وضعیت HER2 و پیشگویی پاسخ به درمان با هرسپتین 40

2-3- HER2/neu فسفریله به عنوان یک مارکرپروگنوستیک و پیش گویی بالقوه 41

2-4- سنجش بخش خارج سلولی HER2 در جریان خون به عنوان تومور مارکر 41

2-5- خلاصه 42

2-2- هدف 43

 

فصل سوم:مواد و روشها 44

مواد و روشها 44

3-1- استخراج RNA ی كل از بافت 45

3-2- بررسی كمی و كیفی RNA ی استخراج شده 50

3-2-1- UV اسپكتروفتومتری 50

3-2-2- الكتروفورز ژل آگارز (106) 52

طرز تهیه محلول ها و بافرهای مورد نیاز در الكتروفورز : 53

محلول اتیدیوم بروماید (10 mg /ml) 54

مواد و وسایل لازم 55

جدول 3-1 – رابطه درصد ژل آگارژ با اندازه مولكول DNA 58

3-3 تیمار RNAی استخراج شده با آنزیم DNase [149] 58

طرز تهیه مخلوط dNTP از هر یك از نوكلئوتیدها 60

3-5- واكنش PCR [2] 63

3-5-1 طراحی پرایمر: 63

3-5-2- آماده سازی پرایمرهای PCR [2] 66

3-7- استخراج DNA از بافت پستانداران با استفاده از Accuprep Genomic DNA Extraction kit (Bioneer) 70

3-7-1- سنجش غلظت DNA 71

3-9- ایمنوهیستوشیمی Immunohistochemical (IHC) Techniques 73

 

فصل چهارم:بحث و نتایج 76

بحث و نتایج 76

4-1- نتایج 77

4-1-1- تعیین کیفیت و کمیت RNA ی استخراجی 77

4-1-2- بهینه سازی واکنش PCR 78

4-1-3-  RT – PCR 80

4-2-  بحث و پیشنهادات 84

4-2-1- بحث 84

4-2-2- علت انتخاب RT- PCR 85

4-2-4- پیشنهادات 87

منابع 88

 

 

 

  • پاورپوینت آشنایی با احکام مسجد قسمت ششم

    پاورپوینت آشنایی با احکام مسجد قسمت ششم پاورپوینت احکام مسجد قسمت ششم دانلود پاورپوینت احکام مسجد قسمت ششم پاورپوینت درباره احکام مسجد قسمت ششم رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت آشنایی با احکام مسجد قسمت ششم جهت رشته فقه و…

  • پاورپوینت نشر اتمی شعله ای

    پاورپوینت نشر اتمی شعله ای پاورپوینت اسپکتروفتومتری نشر شعله ای پاورپوینت نشر اتمی شعله ای پاورپوینت دستگاه نشر اتمی شعله ای پاورپوینت طیف سنجی نشر اتمی aes رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت نشر اتمی شعله ای جهت رشته فیزیک…

  • دانلود پاورپوینت بسته بندی بهداشتی مواد غذایی

    دانلود پاورپوینت بسته بندی بهداشتی مواد غذایی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت بسته بندی بهداشتی مواد غذایی جهت رشته بهداشت در 22 اسلاید و با فرمت pptx  بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش       نقش…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق هویت 55 صفحه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق هویت 55 صفحه کلمات کلیدی : مبانی نظری هویت پیشینه تحقیق هویت پیشینه داخلی هویت پیشینه خارجی هویت پیشینه پژوهش هویت پیشینه نظری هویت ادبیات نظری هویت چارچوب نظری هویت فصل دوم پایان نامه هویت…

  • رتبه بندی راهبردهای پیاده سازی زنجیره تامین چابک با تصمیم گیری چند معیاره فازی

    رتبه بندی راهبردهای پیاده سازی زنجیره تامین چابک با تصمیم گیری چند معیاره فازی کلمات کلیدی : مدیریت زنجیره تامین چابک مولفه های چابکی زنجیره تامین پیاده سازی زنجیره تامین چابک پایان نامه زنجیره تامین چابک مدل های زنجیره تامین…

  • دانلود تحقیق کارکردهای دین و مذهب با فرمت ورد

    دانلود تحقیق کارکردهای دین و مذهب با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی کارکردهای دین و مذهب با فرمت docx در قالب 22 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش می باشد…

  • پاورپوینت انواع و سطوح مدیریت تعارض در سازمان و بررسی علل آن

    پاورپوینت انواع و سطوح مدیریت تعارض در سازمان و بررسی علل آن رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت مدیریت تعارض جهت رشته روانشناسی و مدیریت تربیتی در قالب ۵۳ اسلاید و با فرمت pptx بصورت کامل و جامع و با…

  • پاورپوینت کافی نت یاهو

    پاورپوینت کافی نت یاهو پاورپوینت کافی نت یاهو چیست پاورپوینت درباره کافی نت یاهو پاورپوینت کافی نت پاورپوینت درمورد یاهو رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت کافی نت یاهو جهت رشته ی نرم افزار در قالب 41  اسلاید و با…

  • پاورپوینت كاربرد اصل مومنتوم در جريان كانالهاي باز

    پاورپوینت كاربرد اصل مومنتوم در جريان كانالهاي باز پاورپوینت كاربرد اصل مومنتوم در جريان كانالهاي باز كاربرد اصل مومنتوم در جريان كانالهاي باز كاربرد اصل مومنتوم تابع مومنتوم كانالهاي مستطيلي پرش هيدروليكي ساده حل مسأله دريچه كشويي مقطع هاي غيرمستطيلي…

  • دانلود تحقیق مبانی نظری اقلام تعهدی سود حسابداری با فرمت ورد

    دانلود تحقیق مبانی نظری اقلام تعهدی سود حسابداری با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی مبانی نظری اقلام تعهدی سود حسابداری با فرمت docx در قالب 37 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با…

  • پایان نامه کارشناسی رشته روانشناسی و علوم تربیتی با عنوان بررسی ارتباط بین راهبردهای یادگیری با پیشرفت تحصیلی دانش‌آموزان دختر پایه سوم متوسطه نظری

    پایان نامه کارشناسی رشته روانشناسی و علوم تربیتی با عنوان بررسی ارتباط بین راهبردهای یادگیری با پیشرفت تحصیلی دانش‌آموزان دختر پایه سوم متوسطه نظری راهبردهای یادگیری فرایندهای یاددهی – یادگیری پیشرفت تحصیلی دانش‌آموزان دانلود پایان نامه کارشناسی رشته روانشناسی و…

  • دانلود تحقیق رفتارهای پرخطر و اعتیاد با فرمت ورد

    دانلود تحقیق رفتارهای پرخطر و اعتیاد با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی رفتارهای پرخطر و اعتیاد با فرمت docx در قالب 28 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش می باشد…

  • دانلود تحقیق آموزش کارکنان و اصول آن با فرمت ورد

    دانلود تحقیق آموزش کارکنان و اصول آن با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی آموزش کارکنان و اصول آن با فرمت docx در قالب 26 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق سازگاری دانشجویان با دانشگاه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق سازگاری دانشجویان با دانشگاه فصل دوم پایان نامه سازگاری دانشجویان مبانی نظری سازگاری دانشجویان پیشینه تحقیق سازگاری دانشجویان پیشینه داخلی سازگاری دانشجویان پیشینه خارجی سازگاری دانشجویان پیشینه پژوهش سازگاری دانشجویان پیشینه نظری سازگاری دانشجویان ادبیات…

  • دانلود تحقیق ورزش و اثربخشی آن با فرمت ورد

    دانلود تحقیق ورزش و اثربخشی آن با فرمت ورد رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی ورزش و اثربخشی آن با فرمت docx در قالب 47 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش می باشد…

  • گذری بر تاریخچه ادبیات كهن فارسی

    گذری بر تاریخچه ادبیات كهن فارسی شعر و نثر انواع ادبی ادبیات كهن فارسی حماسه‌های ملی ایرانی دانلود مقاله گذری بر تاریخچه ادبیات كهن فارسی سیستم همکاری در فروش فایل فایلینا همکاری در فروش فایل همکاری در فروش فروش فایل…

  • پاورپوینت زوج درمانی و درمان هیجان مدار

    پاورپوینت زوج درمانی و درمان هیجان مدار رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت زوج درمانی و درمان هیجان مدار جهت رشته ی روان شناسی در قالب 89 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت…

  • دانلود پاورپوینت تولید ملکه زنبور عسل اصلاح شده

    دانلود پاورپوینت تولید ملکه زنبور عسل اصلاح شده رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت تولید ملکه زنبور عسل اصلاح شده  جهت رشته دامپروری در 31 اسلاید و با فرمت pptx  بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش    …

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق ریسک نقدشوندگی 70 صفحه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق ریسک نقدشوندگی 70 صفحه کلمات کلیدی : مبانی نظری نقدشوندگی پیشینه تحقیق نقدشوندگی مبانی نظری ریسک نقدشوندگی پیشینه تحقیق ریسک نقدشوندگی پیشینه داخلی ریسک نقدشوندگی پیشینه خارجی ریسک نقدشوندگی پیشینه پژوهش ریسک نقدشوندگی پیشینه نظری…

  • دلایل برون سپاری فعالیت ها و بررسی اثربخشی آنها در سازمان

    دلایل برون سپاری فعالیت ها و بررسی اثربخشی آنها در سازمان پایان نامه برون سپاری دانلود پایان نامه برون سپاری پایان نامه با موضوع برون سپاری پایان نامه در خصوص برون سپاری اثر بخشی و برون سپاری تاثیر برون سپاری…

  • GIS به عنوان سکوی داده های مکانی جهت پردازش داده های تصویری و همچنین تجزیه و تحلیل کلیه اقدامات مربوط به فیزیوگرافی حوزه آبریز

    GIS به عنوان سکوی داده های مکانی جهت پردازش داده های تصویری و همچنین تجزیه و تحلیل کلیه اقدامات مربوط به فیزیوگرافی حوزه آبریز GIS حوزه آبریز فیزیوگرافی جی‌آی‌اس پردازش داده های تصویری سیستم اطلاعات جغرافیایی فن آوری سنجش از…

  • پاورپوینت کتاب اصول اساسی برنامه نویسی به زبان اسمبلی از هاشمی اصل

    پاورپوینت کتاب اصول اساسی برنامه نویسی به زبان اسمبلی از هاشمی اصل پاورپوینت برنامه نویسی اسمبلی چیست پاورپوینت آموزش برنامه نویسی اسمبلی رشته کامپیوتر پاورپوینت جزوه آموزش برنامه نویسی اسمبلی پاورپوینت کتاب برنامه نویسی اسمبلی هاشمی اصل رفتن به سايت…

  • دانلود پاورپوینت روانسنجی

    دانلود پاورپوینت روانسنجی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت روانسنجی جهت رشته روانشناسی در 183 اسلاید و با فرمت pptx  بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش       آزمون سازي درروانشناسي سابقه اي نسبتاَ طولاني دارد. جيمز…

  • پاورپوینت دوره عمر محصول

    پاورپوینت دوره عمر محصول پاورپوینت هزینه یابی دوره عمر محصول پاورپوینت دوره عمر محصولات پاورپوینت دوره عمر محصول چیست پاورپوینت دوره عمر یک محصول پاورپوینت دوره چرخه عمر محصول رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت دوره عمر محصول جهت رشته مدیریت…

  • بررسی عوامل تاثیرگذار سیاست خارجی اسرائیل  بر امنیت ملی جمهوری اسلامی ایران

    بررسی عوامل تاثیرگذار سیاست خارجی اسرائیل  بر امنیت ملی جمهوری اسلامی ایران کلمات کلیدی : پایان نامه اسرائيل سياست خارجي اسرائيل سياست خارجي رژيم صهيونيستي  سياست خارجي اسرائيل در قبال ايران درک رفتار سياست خارجي رژيم صهيونيستي عوامل تاثیرگذار سیاست…

  • پاورپوينت سیستم نگهداری داده ها

    پاورپوينت سیستم نگهداری داده ها پاورپوينت سیستم نگهداری داده پاورپوينت سیستم نگهداری داده ها پاورپوينت در مورد سیستم نگهداری داده ها دانلود پاورپوينت سیستم نگهداری داده ها دانلود سیستم نگهداری داده ها دانلود پاورپوينت در مورد سیستم نگهداری داده ها…

  • امنیت شبکه های بی سیم Wi-Fi

    امنیت شبکه های بی سیم Wi-Fi وای فای شبکه های بی سیم استاندارد IEEE80211 امن سازی شبكه های محلی بی سیم دانلود مقاله امنیت شبکه های بی سیم WiFi سیستم همکاری در فروش فایل همکاری در فروش فایل همکاری در…

  • پاورپوینت يادگيری تسلط ياب و مراحل آن

    پاورپوینت يادگيری تسلط ياب و مراحل آن رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت يادگيری تسلط ياب و مراحل آن جهت رشته روانشناسی در قالب 6 اسلاید و با فرمت pptx بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش    …

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق تسهیم دانش

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق تسهیم دانش مبانی نظری تسهیم دانش دانلود مبانی نظری تسهیم دانش پیشینه تحقیق تسهیم دانش ادبیات نظری تسهیم دانش فصل دوم پایان نامه تسهیم دانش مبانی نظری و پیشینه تحقیق تسهیم دانش ادبیات و مبانی…

  • پاورپوینت آموزشی درس سیستم های اطلاعات مدیریت

    پاورپوینت آموزشی درس سیستم های اطلاعات مدیریت رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت آموزشی درس سیستم های اطلاعات مدیریت جهت رشته مدیریت در قالب 51 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش  …

  • بررسی عناصر تشکیل دهنده جرم محاربه

    بررسی عناصر تشکیل دهنده جرم محاربه تعریف محاربه جرم محاربه عناصر جرم محاربه دانلود تحقیق جرم محاربه عناصر تشکیل دهنده جرم محاربه مقاله در مورد محاربه ارکان جرم محاربه محاربه در قانون مجازات اسلامی 1392 محاربه در قانون مجازات اسلامی…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق مدل راهبردی کیفیت خدمات 61 صفحه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق مدل راهبردی کیفیت خدمات 61 صفحه کلمات کلیدی : مبانی نظری مدل راهبردی کیفیت خدمات پیشینه پژوهش مدل راهبردی کیفیت خدمات دانلود مبانی نظری مدل راهبردی کیفیت خدمات پیشینه تحقیق مدل راهبردی کیفیت خدمات ادبیات…

  • پاورپوینت آشنایی با مرکز داوری ایکسید (ICSID)

    پاورپوینت آشنایی با مرکز داوری ایکسید (ICSID) کلمات کلیدی : پاورپوینت آشنایی با مرکز داوری ایکسیدICSID ICSID الحاق ایران به سازمان داوری ایکسید ساختار ایکسید نظام داوری ایکسید مقایسه ایکسید با ICC مقایسه ایکسید با دیوان بین المللی دادگستری ICJ…

  • پاورپوینت چدن های با گرافیت فشرده

    پاورپوینت چدن های با گرافیت فشرده رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت چدن های با گرافیت فشرده جهت رشته ی مهندسی در قالب 29 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش    …

  • دانلود چارچوب و مبانی نظری در مورد هوش هیجانی و ارتباط آن با حسابداری با فرمت word

    دانلود چارچوب و مبانی نظری در مورد هوش هیجانی و ارتباط آن با حسابداری با فرمت word رفتن به سايت اصلي خرید و دانلود فصل دوم پایان نامه و ادبیات نظری درباره هوش هیجانی و ارتباط آن با حسابداری با…